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    大鼠超氧化物歧化酶(SOD)ELISA試劑盒技術(shù)操作及價(jià)格

    更新時(shí)間:2017-05-17      瀏覽次數(shù):2343

    大鼠超氧化物歧化酶(SOD)ELISA試劑盒技術(shù)操作及價(jià)格

    本試劑盒用于體外定量檢測(cè)血清、血漿、組織勻漿及相關(guān)液體樣本大鼠超氧化物歧化酶SOD)的含量。

    有效期:6個(gè)月

    保存條件:2-8℃

    實(shí)驗(yàn)原理

    試劑盒采用雙抗體一步夾心法酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(ELISA)。往預(yù)先包大鼠超氧化物歧化酶SOD)捕獲抗體的包被微孔中,依次加入標(biāo)本、標(biāo)準(zhǔn)品、HRP標(biāo)記的檢測(cè)抗體,經(jīng)過溫育并*洗滌。用底物TMB顯色,TMB在過氧化物酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色,并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成zui終的黃色。顏色的深淺和樣品中的大鼠超氧化物歧化酶SOD)呈正相關(guān)。用酶標(biāo)儀在450nm 波長(zhǎng)下測(cè)定吸光度(OD 值),計(jì)算樣品濃度。

     

    試劑盒組成

     

    名稱

    96孔配置

    48孔配置

    備注

    微孔酶標(biāo)板

    8孔×12

    8孔×6

    標(biāo)準(zhǔn)品

    0.3mL*6管

    0.3mL*6管

    樣本稀釋液

    6mL

    3mL

    檢測(cè)抗體-HRP

    10mL

    5mL

    20×洗滌緩沖液

    25mL

    15mL

    按說明書進(jìn)行稀釋

    底物A

    6mL

    3mL

    底物B

    6mL

    3mL

    終止液

    6mL

    3mL

    封板膜

    2張

    2張

    說明書

    1份

    1份

    自封袋

    1個(gè)

    1個(gè)

    1.  標(biāo)準(zhǔn)品濃度依次為:200、100、50、25、12.5、6.25 U/mL

    2.  經(jīng)過大量正常標(biāo)本檢驗(yàn),標(biāo)本的正常濃度值均在試劑盒提供的檢測(cè)范圍內(nèi),實(shí)驗(yàn)過程中直接取50μL樣本上樣即可。當(dāng)有部分樣本值超過zui大標(biāo)準(zhǔn)品濃度時(shí),可用樣本稀釋液將標(biāo)本進(jìn)行適當(dāng)稀釋后再進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。

     

    注意事項(xiàng)

    • 嚴(yán)格按照規(guī)定的時(shí)間和溫度進(jìn)行溫育以保證準(zhǔn)確結(jié)果。所有試劑都必須在使用前達(dá)到室溫20-25℃。使用后立即冷藏保存試劑。
    • 洗板不正確可以導(dǎo)致不準(zhǔn)確的結(jié)果。在加入底物前確保盡量吸干孔內(nèi)液體。溫育過程中不要讓微孔干燥掉。
    • 消除板底殘留的液體和手指印,否則影響OD值。
    • 底物顯色液應(yīng)呈無色或很淺的顏色,已經(jīng)變藍(lán)的底物液不能使用。
    • 避免試劑和標(biāo)本的交叉污染以免造成錯(cuò)誤結(jié)果。
    • 在儲(chǔ)存和溫育時(shí)避免強(qiáng)光直接照射。
    • 平衡至室溫后再打開密封袋以防水滴凝聚在冷板條上。
    • 任何反應(yīng)試劑不能接觸漂白溶劑或漂白溶劑所散發(fā)的強(qiáng)烈氣體。任何漂白成分都會(huì)破壞試劑盒中反應(yīng)試劑的生物活性。
    • 不能使用過期產(chǎn)品。
    • 如果可能傳播疾病,所有的樣品都應(yīng)管理好,按照規(guī)定的程序處理樣品和檢測(cè)裝置

     

    試劑準(zhǔn)備

    試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應(yīng)在室溫平衡后方可使用。

    20×洗滌緩沖液的稀釋:蒸餾水按1:20稀釋,即1份20×洗滌緩沖液加19份蒸餾水。

     

    操作步驟

    1.   從室溫平衡20min后的鋁箔袋中取出所需板條,剩余板條用自封袋密封放回4℃。
    2.   設(shè)置標(biāo)準(zhǔn)品孔和樣本孔,標(biāo)準(zhǔn)品孔各加不同濃度的標(biāo)準(zhǔn)品50μL;
    3.   樣本孔待測(cè)樣本50μL;空白孔不加。
    4.   除空白孔外,標(biāo)準(zhǔn)品孔和樣本孔中每孔加入辣根過氧化物酶(HRP)標(biāo)記的檢測(cè)抗體100μL,用封板膜封住反應(yīng)孔,37℃水浴鍋或恒溫箱溫育60min。
    5.   棄去液體,吸水紙上拍干,每孔加滿洗滌液(350μL,靜置1min,甩去洗滌液,吸水紙上拍干,如此重復(fù)洗板5次(也可用洗板機(jī)洗板)。
    6.   每孔加入底物A、B各50μL,37℃避光孵育15min。
    7.   每孔加入終止液50μL,15min內(nèi),在450nm波長(zhǎng)處測(cè)定各孔的OD值。

     

    實(shí)驗(yàn)結(jié)果計(jì)算

    所測(cè)標(biāo)準(zhǔn)品的OD值為橫坐標(biāo),標(biāo)準(zhǔn)品的濃度值為縱坐標(biāo),在坐標(biāo)紙上或用相關(guān)軟件繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線,并得到直線回歸方程將樣品的OD值代入方程,計(jì)算出樣品濃度

     

    試劑盒性能

    •  檢測(cè)范圍6.25 U/mL  200 U/mL。
    •  靈敏度:zui低檢測(cè)濃度小于1.0 U/mL
    •  特異性:不與其它可溶性結(jié)構(gòu)類似物交叉反應(yīng)。
    •  重復(fù)性:板內(nèi)變異系數(shù)小于10% ,板間變異系數(shù)小于15% 。
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